玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、滅菌

      一、實驗?zāi)康囊?br /> 　　1、進一步加強學(xué)習(xí)、掌握玻璃 器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技術(shù)。
　　2、為下一次的課做好器材的準(zhǔn)備工作。
　　二、原理
　　為確保實驗順利地進行，要求把實驗所用的玻璃器皿清洗干凈。為保持滅菌后和無菌狀態(tài)，需要對培養(yǎng)皿、吸管等進行包扎，對試管和三角瓶等加塞棉塞。這些工作看起來很普通簡單，但如操作不當(dāng)或不安操作規(guī)定去做，則會影響實驗結(jié)果，甚至?xí)?dǎo)致試驗的失敗。
　　滅菌原理：高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。適用于一般培養(yǎng)基、玻璃器皿、無菌水、金屬用具。一般培養(yǎng)基在121．3℃滅菌20分鐘即可。干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160—170℃），時間長（1—2小時）。但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會烤焦，甚至引起燃燒，因而一般塑料制品不能用干熱滅菌。
　　三、試劑和儀器
　?。ㄒ唬﹥x器
　　高壓蒸汽滅菌鍋、電熱烘箱、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿和吸管、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報紙、硅膠塞等
　　四、實驗內(nèi)容
　　（一）玻璃器皿的清洗：
　　l新購的玻璃器皿的洗滌
　　將器皿放入２％鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，以除去游離的堿性物質(zhì)，最后用流水沖凈。
　　對容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉(zhuǎn)動容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架上晾干，即可使用。
　　l常用舊玻璃器皿的洗滌
　　確實無病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用前后，可按常規(guī)用洗衣粉水進行刷洗；
　　吸取過化學(xué)試劑的吸管，先浸泡于清水中，待到一定數(shù)量后再集中進行清洗。
　　l帶菌玻璃器皿的洗滌
　　凡實驗室用過的菌種以及帶有活菌的各種玻璃器皿，必須經(jīng)過高溫滅菌或消毒后才能進行刷洗：
　　1、帶菌培養(yǎng)皿、試管、三角瓶等物品，做完實驗后放入消毒桶內(nèi)，用0.1MPa滅菌20～30min后再刷洗。含菌培養(yǎng)皿的滅菌，底蓋要分開放入不同的桶中，再進行高壓滅菌。
　　2、帶菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內(nèi)消毒24h后，再經(jīng)0.1MPa滅菌20min后，取出沖洗。
　　3、帶菌載玻片及蓋玻片，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內(nèi)消毒24h后，用夾子取出經(jīng)清水沖干凈。
　　如用于細(xì)菌染色的載玻片，要放入50g/L肥皂水中煮沸10min，然后用肥皂水洗，再用清水洗干凈。
　　u最后將載玻片浸入95%酒精中片刻，取出用軟布擦干，或晾干，保存?zhèn)溆谩?br /> 　　若用皂液不能洗凈的器皿，可用洗液浸泡適當(dāng)時間后再用清水洗凈。
　　4、含油脂帶菌器材的清洗
　　單獨高壓滅菌：用0.1MPa滅菌20～30min→趁熱倒去污物→倒放在鋪有吸水紙的籃子上→用100℃烘烤0.5h→用5%的碳酸氫鈉水煮兩次→再用肥皂水刷洗干凈。
　?。ǘ?、玻璃器材的晾干或烘干
　　不急用的玻璃器材：可放在實驗室中自然晾干；
　　急用的玻璃器材：把器材放在托盤中（大件的器材可直接放入烘箱中），再放入烘箱內(nèi)，用80～120℃烘干，當(dāng)溫度下降到60℃以下再打開取出器材使用。
　?。ㄈ┢髅蟮陌?br /> 　　要滅菌后的器皿仍保持無菌狀態(tài)，需在滅菌前進行包扎。
　?。?）培養(yǎng)皿：洗凈的培養(yǎng)皿烘干后每10套（或根據(jù)需要而定）疊在一起，用牢固的紙卷成一筒，或裝入特制的鐵桶中，然后進行滅菌。